设计PCR与qPCR实验
Design PCR and qPCR Assays · 🟡进阶 · 所属分类：实验室研究与实验方法
自己挑引物，一不留神就忽略了二聚体、发夹、Tm 不匹配、跨外显子、脱靶或 SNP 位点，结果非特异扩增、效率差，反复重设计白白耗周期。它帮你生成特异、能扩出来的引物（需要时带探针），把这些参数一项项核过，再给出反应条件和效率验证建议。
适合谁
要做基因表达定量或分型的研究生、需要快速出可靠引物的分子实验人员。
给它什么 · 得到什么
- 你提供：目标序列或基因/转录本 ID 与物种、扩增用途（定性/定量/分型/克隆）、化学体系（SYBR 或 TaqMan 探针）、期望产物长度和 Tm 范围、要规避的区域或多态位点
- 你得到：一组候选引物（必要时含探针）——序列、Tm/GC/产物长度、二聚体与发夹评估、跨外显子和特异性（BLAST）核查说明、推荐反应条件与效率验证/标准曲线建议，还附上可复现的 primer3 参数
怎么用
比如：「帮我给人 GAPDH 设计一对跨外显子的 qPCR 引物，用 SYBR 体系，产物 100–150 bp，避开常见 SNP。」 它会用 primer3 按你的约束生成候选，逐个评估二聚体/发夹/Tm 平衡，做特异性和跨外显子核查，并给出扩增效率和熔解曲线的验证方案。
提个醒
计算机预测的特异性和效率必须湿实验验证（梯度/标准曲线/熔解曲线）；它依赖 primer3 和序列数据库，你给的序列或注释有错会一路传到结果里。